Prominence nano 納升液相色譜儀
Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng),可在納升流量下進(jìn)行精準(zhǔn)流速的溶劑輸送。按照應(yīng)用不同,可以配置成1D和2D系統(tǒng)。
Prominence nano具備納升流速下的高保留時(shí)間重復(fù)性,非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點(diǎn)。
Nano-Assist一維LC設(shè)置圖
應(yīng)用
高保留時(shí)間重復(fù)性
蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異,而樣本中又存在許多特征相似的多肽,對(duì)保留時(shí)間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù),配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過(guò)0.2% 的保留時(shí)間重復(fù)性。
牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性
2維 LC的高分辨率
牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性
在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí),單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量;所以,為了實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離,需要進(jìn)行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進(jìn)行2D分析,結(jié)合陽(yáng)離子交換和反相模式,為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù)。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖,1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個(gè)組分,2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。
分析條件
1維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動(dòng)相 |
甲酸銨緩沖液 濃度STEP梯度 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 |
(5 mmL.×300 ?m I.D.) L-column (micro) |
捕集時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
脫鹽溶劑 | 水/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.) |
流動(dòng)相 |
梯度洗脫 A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測(cè) | LCMS-IT-TOF |
樣本 |
酵母蛋白中的蛋白 (相當(dāng)于200 fmol的) |
分別利用1維和2維中不同類型的柱體進(jìn)行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下,分離或檢測(cè)方法由于使用的移動(dòng)相分離模式或類型之間的相互作用,可能會(huì)有一些限制。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過(guò)nano ESI接口連接LCMS使用,還可連接到配有自動(dòng)點(diǎn)靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰,需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內(nèi)精確控制流速,Prominence nano系統(tǒng)的完全滿足了此需要。
酶解BSA樣品的UV色譜圖(500fmol)
分析條件
檢測(cè)器 | UV220 nm |
柱 |
MonoCap for Fast-flow 快速M(fèi)onoCap (250 mmL. × 100 μm I.D.) |
流動(dòng)相 |
1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) 2、梯度洗脫 |
流速 | 1 μL/min |
溫度 | 環(huán)境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點(diǎn)靶間隔 |
12 秒的點(diǎn)斷 每點(diǎn)液體:200nL(不包括基質(zhì)) |
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分析儀器
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