神經(jīng)肌肉接頭(NMJ)是突觸前運動神經(jīng)元和突觸后骨骼肌纖維之間的外周突觸連接,可實現(xiàn)肌肉收縮和自主運動。許多創(chuàng)傷性、神經(jīng)退行性和神經(jīng)免疫性疾病通常被認為主要影響NMJ的神經(jīng)元或肌肉側(cè),并且缺乏治療選擇。新技術(shù)的最新進展有助于開發(fā)NMJ的體外生理和病理生理模型,并能夠?qū)ζ涔δ苓M行精確控制和評估。
近日,來自東南大學(xué)的顧忠澤教授、中國航天員科研訓(xùn)練中心的李瑩輝研究員聯(lián)合北京航空航天大學(xué)的鄭付印和樊瑜波教授團隊回顧了利用2D或3D技術(shù)培養(yǎng)的包括器官芯片、類器官以及生物混合機器人(圖1)在內(nèi)的體外NMJ模型的最新發(fā)展。作者首先介紹了用于NMJ功能分析的相關(guān)衍生技術(shù),例如膜片鉗技術(shù)、微電極陣列、鈣成像和刺激方法,然后總結(jié)了體外NMJ模型在疾病模型或與適宜神經(jīng)肌肉疾病相關(guān)的藥物篩選中的應(yīng)用,并討論了其未來的發(fā)展趨勢和挑戰(zhàn)。
圖1 神經(jīng)肌肉接頭體外模型:器官芯片、類器官和生物混合機器人
2D培養(yǎng)是指將細胞培養(yǎng)在平坦的基質(zhì)上,細胞只能沿著平面延伸的傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)技術(shù)。在神經(jīng)肌肉接頭共培養(yǎng)實驗中,早期使用了動物模型,其中將雞、嚙齒動物或非洲爪蟾的胚胎脊髓和發(fā)育中的神經(jīng)節(jié)與肌肉一起培養(yǎng)。然而,由于動物和人類之間存在自然物種差異,因此動物模型無法復(fù)制人類疾病的整個過程(圖2)。
圖2 2D培養(yǎng)物的免疫染色圖像
3D培養(yǎng)是指將細胞培養(yǎng)在三維環(huán)境中,這種技術(shù)類似于生物組織中的細胞外基質(zhì)(ECM),可以更好地模擬體內(nèi)的生長環(huán)境(圖3)。在3D環(huán)境中生長的細胞支持其自然的三維物理形態(tài),使得細胞能夠以更真實的方式生長和適應(yīng)其環(huán)境。3D培養(yǎng)具有很大的潛力,可用于藥物篩選和測試系統(tǒng)、研究疾病機制以及評估藥物安全性和有效性。
圖3 肌管和運動神經(jīng)元(MN)的共染色或乙酰膽堿受體簇染色證實了神經(jīng)肌肉接頭(NMJ)的形成
目前,器官芯片的基本雙腔室設(shè)計已被擴展到復(fù)雜的多腔室陣列,可以在微流控系統(tǒng)中形成準(zhǔn)確的細胞組織組合模式。這種設(shè)計允許精確控制多個物理和化學(xué)培養(yǎng)條件以及不同腔室之間的通信(圖4)。
圖4神經(jīng)肌肉接頭(NMJ)器官芯片模型
神經(jīng)肌肉接頭的類器官模型是指由人多能干細胞(hiPSC)誘導(dǎo)的軸突神經(jīng)元和骨骼肌細胞自組裝形成的三維結(jié)構(gòu)。這些模型可以促進不同類型的細胞在自組裝的三維結(jié)構(gòu)中形成體系結(jié)構(gòu)和相互作用,更類似于體內(nèi)原有的組織。這種技術(shù)可以用于研究與NMJ發(fā)展、維護、退化和再生有關(guān)的正常生理或病理事件,并提供了一個從幾周到幾個月甚至更長時間窗口(圖5)。
圖5 (A)神經(jīng)末梢頂端的許旺細胞表達S100β陽性,證實了功能性NMJ的形成;(B)TUJ1染色顯示存在神經(jīng)元;(C)視神經(jīng)脊髓炎影像顯示肌肉細胞和神經(jīng)元的形成
生物混合機器人模型是指將活細胞和彈性材料組裝而成的機器人。這種技術(shù)可以準(zhǔn)確地模擬組織和器官系統(tǒng)或生物體的行為、微結(jié)構(gòu)和功能。由神經(jīng)肌肉單元驅(qū)動的生物混合機器人可以通過刺激共培養(yǎng)的運動神經(jīng)元來誘導(dǎo)工程骨骼肌組織在柔性的自立支架上收縮,從而產(chǎn)生復(fù)雜的運動模式(圖6)。
圖6 (A)“脊柱機器人”:腰椎支配肌肉組織,使PDMS柱偏轉(zhuǎn);(B)中心MN被周圍的脊柱機器人包圍并支配;(C)“游泳機器人”:光激活MN主導(dǎo)脊柱機器人運動
綜上所述,該綜述總結(jié)了神經(jīng)肌肉接頭(NMJ)體外模型的研究進展,包括器官芯片模型、類器官模型、生物混合機器人模型等。這些模型可以用于研究與NMJ相關(guān)的疾病,如肌萎縮側(cè)索硬化、重癥肌無力等,并為藥物篩選提供了新的平臺。未來方向包括開發(fā)更加復(fù)雜和真實的NMJ模型,以更好地理解神經(jīng)肌肉發(fā)育和退化的機制,并為治療相關(guān)疾病提供新的治療方法。此外,還需要進一步探索這些模型在臨床前藥物篩選中的應(yīng)用,并將其應(yīng)用于個性化醫(yī)學(xué)。
審核編輯:劉清
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原文標(biāo)題:神經(jīng)肌肉接頭體外模型研究進展:器官芯片、類器官和生物混合機器人
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