色譜法(Chromatography)

色譜法種類繁多，按照作用原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和空間排阻色譜等。吸附色譜利用固定相對混合物中不同化合物的吸附能力不同而實現(xiàn)分離，包括薄層色譜、柱色譜、氣相色譜和高效液相色譜等；分配色譜利用化合物在固定相和流動相之間不同的溶解度實現(xiàn)分離，如薄膜分配色譜；離子交換色譜的原理是帶有電荷的固定相被相反電荷的離子流動相中和，當(dāng)樣品進(jìn)入離子交換色譜柱后，流動相離子會和樣品離子爭奪固定相的電荷，因為不同化合物具有不同的電荷競爭力而使樣品得到分離；空間排阻色譜的原理是利用具多孔物質(zhì)按分子大小進(jìn)行分離，樣品經(jīng)過多孔物質(zhì)的固定相時，大分子不能進(jìn)入固定相的膠孔而受到排阻，首先流出色譜柱，小分子可以進(jìn)入固定相膠孔，最后慢慢被流動相洗脫出來，故保留時間較長，因而不同大小的分子能在空間排阻色譜中得到分離，典型的空間排阻色譜是凝膠柱色譜。

薄層色譜（Thin Layer Chromatography，TLC）

用毛細(xì)管把溶解有機物的樣品點在薄層色譜板的原點，然后把點有樣品的薄層色譜板放置在事先已經(jīng)加入展開劑的展開槽中展開，等展開劑即將到達(dá)薄層色譜板上端之時取出薄層色譜板，吹干展開劑后顯色。

常用顯色劑及適用范圍見下圖：

柱色譜

柱色譜的基本原理是利用色譜柱中固定相對混合物各組分的吸附能力、分子排阻能力或者親和作用的不同來實現(xiàn)分離，當(dāng)流動相或洗脫劑流過和固定相接觸的樣品時，部分樣品組分首先隨著流動相流出，另外的樣品后流出，這樣就能分離混合物中不同的組分。

吸附柱色譜常用的吸附劑有如下幾種：

（1） 正相硅膠: 硅膠的成分是SiO 2 ·xH2O，通常有6080目、100200目、200300目、300400目等不同規(guī)格，目數(shù)越高，硅膠越細(xì)，分離效果會越好。正相硅膠柱對極性小的組分吸附能力弱，首先分離出來，而對極性大的組分吸附能力強，在較大極性洗脫劑的沖洗下才能被洗脫。

（2） 反相硅膠: 正相硅膠通過化學(xué)反應(yīng)鍵合加入官能團，如含有8個碳或18個碳的碳鏈成為反相硅膠C-8 或C-18，在反相硅膠中，極性大的樣品組分首先被洗脫。

（3） 氧化鋁: 有堿性、中性和酸性三種。堿性氧化鋁用于分離堿性物質(zhì)和對酸敏感的樣品。酸性氧化鋁用于分離酸性物質(zhì)。中性氧化鋁用于分離醛、酮、醌、內(nèi)酯等物質(zhì)。

（4） 聚酰胺: 也稱聚己內(nèi)酰胺，不溶于水和一般有機溶劑，聚酰胺分子表面的末端胺基和酰胺基能和樣品組分中的酚羥基、酸、硝基等官能團形成強度不等的氫鍵，因此可以分離含羥基、羧酸、氨基、亞氨基、硝基等類型的化合物。

離子交換色譜

離子交換色譜的固定相是離子交換樹脂，其是球狀或無定形粒狀的高分子化合物，內(nèi)部由苯乙烯等材料通過二乙烯苯交聯(lián)聚合而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，帶有能解離的基團作為被交換離子。該類樹脂可以在水溶液中與其他離子進(jìn)行可逆交換從而分離離子型化合物，常用于分離含離子基團的成分以及水溶性物質(zhì)等類型的化合物。離子交換樹脂分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂。

大孔吸附樹脂

大孔吸附樹脂是具有吸附作用的大孔結(jié)構(gòu)的高分子樹脂，其根據(jù)化合物分子體積大小和樹脂對化合物吸附力的強弱來分離樣品。大孔樹脂分為極性大孔吸附樹脂、中極性大孔吸附樹脂和非極性大孔吸附樹脂，具有機械強度高、選擇性好、吸附容量大、易解吸附的特點。

凝膠色譜法

凝膠柱色譜以凝膠作為固定相，各組分因為分子的大小不同而被分離。凝膠是細(xì)微多孔的的聚合體，孔隙有大有小，小分子化合物因為體積較小，可以自由地進(jìn)入凝膠的孔隙，又能自由地滲出孔外，隨流動相的移動而移動，所以小分子的化合物在凝膠色譜中保留體積大，保留時間長；分子較大的化合物不能滲入疑膠孔隙，直接隨著洗脫劑流出凝膠色譜柱，保留時間短，保留體積小。常用的色譜凝膠有葡聚糖凝膠（交聯(lián)葡聚糖）、葡聚糖凝膠LH-20和瓊脂糖凝膠等。

高效液相色譜 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC)

高效液相色譜儀由泵、色譜柱、進(jìn)樣器、檢測器、餾分收集器、數(shù)據(jù)處理和操作系統(tǒng)等部分組成。溶劑瓶中的洗脫劑由泵吸入后加壓，平穩(wěn)地輸入進(jìn)樣器，樣品由進(jìn)樣器注入，和洗脫劑混合后進(jìn)入色譜柱，分離后再進(jìn)入檢測器。檢測信號由計算機采集和進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到色譜峰面積和色譜圖等。高效液相色譜可分為分析型、制備型等類型，具有柱效高、選擇性高、效率高、靈敏度高的特點。