神經(jīng)細(xì)胞膜電位變化的熒光成像

所用相機(jī)：

ORCA-Flash4.0 V3(C13440-20CU)

成像方法：

寬場(chǎng)熒光

應(yīng)用描述：

電壓敏感的熒光蛋白定位于細(xì)胞膜上，與離子通道相偶聯(lián)。神經(jīng)細(xì)胞的膜電位變化會(huì)引起該蛋白熒光強(qiáng)弱的變化，從而使膜電位“可視化”。傳統(tǒng)的CCD或普通高速CMOS相機(jī)由于靈敏度和幀速上限太低，往往和肉眼觀察一樣，分辨不出熒光信號(hào)的快速變化;該實(shí)驗(yàn)使用濱松Flash4.0 V3，在USB 3.0的連接方式下將幀速提高至1,0000 fps，使1 ms內(nèi)的熒光變化也能夠清晰的呈現(xiàn)出來(lái)。

# 詳細(xì)描述

該實(shí)驗(yàn)使用胚胎期電轉(zhuǎn)質(zhì)粒的方式，讓小鼠腦部特定類群的神經(jīng)元表達(dá)電壓敏感的熒光蛋白ASAP1，配合膜片鉗系統(tǒng)對(duì)腦片中被標(biāo)記的神經(jīng)元給予電刺激，使其膜電位產(chǎn)生變化;同時(shí)利用Flash4.0 V3的超高速成像能力，捕捉熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)變化。

1. 在512*128的ROI(region of interst)下，可以用1600 fps的幀速記錄單個(gè)神經(jīng)細(xì)胞胞體的膜電位變化。

2. 在512*8的ROI下，其幀速可以達(dá)到10000 fps。在該尺度下可以達(dá)到每個(gè)電位的Spike記錄5-10個(gè)采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)，且其信號(hào)的信噪比仍然很好。

3. 成像系統(tǒng)配置：Olympus BX51WI + Hamamatsu Flash4.0 V3

審核編輯 黃宇