Y染色體缺失(LOY)與膀胱癌有關(guān)(10-40%),但其臨床和生物學(xué)意義尚不清楚。本研究對(duì)自然發(fā)生的LOY突變型膀胱癌細(xì)胞以及通過(guò)CRISPR-Cas9靶向缺失Y染色體的細(xì)胞進(jìn)行了深入的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Y陽(yáng)性(Y+)和Y陰性(Y-)腫瘤在體外生長(zhǎng)相似,而在體內(nèi)Y-腫瘤比Y+腫瘤更具侵襲性。LOY突變的癌細(xì)胞改變了T細(xì)胞的功能,促進(jìn)T細(xì)胞衰竭,并使其對(duì)PD-1靶向免疫治療更敏感。Y染色體相關(guān)基因UTY和KDM5D的缺失有可能成為確定膀胱癌臨床侵襲性的重要預(yù)后因素。通過(guò)單核RNA測(cè)序和空間蛋白質(zhì)組學(xué)分析,對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行了進(jìn)一步驗(yàn)證,為了解LOY突變生物學(xué)機(jī)制和改善癌癥免疫治療的潛在生物標(biāo)志物提供了見(jiàn)解。
01研究結(jié)果
1、LOY與患者較差的預(yù)后相關(guān)
首先,研究者根據(jù)膀胱內(nèi)膜正常細(xì)胞中Y染色體相關(guān)的18個(gè)編碼基因的表達(dá)模式,開(kāi)發(fā)了一種評(píng)分系統(tǒng)來(lái)測(cè)量癌癥中Y染色體的缺失。然后,利用該評(píng)分對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中300名肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌(MIBC)的男性患者的生存率進(jìn)行分析。通過(guò)評(píng)分將樣本分為兩組:Yhigh(n=182)和 Ylow(n=118)組,Ylow組生存率明顯低于Yhigh組。同時(shí),研究者發(fā)現(xiàn),4個(gè)Y染色體基因(KDM5D、UTY、TBL1Y和ZFY)表達(dá)減少與預(yù)后不良有關(guān)。
Fig 1 LOY與男性MIBC患者較差的預(yù)后有關(guān)
2、建立LOY小鼠膀胱癌模型研究腫瘤侵襲性機(jī)制
為了確定為什么缺少Y染色體的膀胱癌更具侵襲性,研究人員接下來(lái)通過(guò)小鼠膀胱癌模型進(jìn)行進(jìn)一步研究。研究者評(píng)估了MB49的Y染色體基因表達(dá)(小鼠膀胱癌細(xì)胞系,已被研究證明會(huì)自然失去Y染色體),并進(jìn)行體外和體內(nèi)培養(yǎng)。在體外培養(yǎng)中,研究者發(fā)現(xiàn)Y?和Y+亞群之間的增殖沒(méi)有差異。將Y?和Y+系皮下注射到野生型雄性C57BL/6小鼠以及免疫缺陷小鼠模型中,研究LOY對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在免疫系統(tǒng)完整的小鼠中,Y?腫瘤生長(zhǎng)速度比Y+腫瘤更快;而在免疫缺陷Rag2?/?Il2rg?/?小鼠中生長(zhǎng)速度相同,這表明Y?腫瘤可能與抗腫瘤適應(yīng)性免疫逃避有關(guān)。接下來(lái),研究者通過(guò)干預(yù)Y染色體相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)一步確定Y?腫瘤中導(dǎo)致免疫逃逸的分子驅(qū)動(dòng)因素。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Uty和Kdm5d 與Y?腫瘤的抗腫瘤免疫功能受損,推測(cè)可能是確定膀胱癌臨床侵襲性的一個(gè)潛在的預(yù)后因素。
Fig 2 LOY以及Y染色體基因Kdm5d和Uty的缺失促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)
3、LOY癌細(xì)胞產(chǎn)生免疫抑制TME
研究者發(fā)現(xiàn),在WT和B細(xì)胞缺陷小鼠中,Y?腫瘤生長(zhǎng)更快;然而,在T細(xì)胞缺陷小鼠中,Y+和Y?腫瘤的生長(zhǎng)速度無(wú)差異,說(shuō)明內(nèi)源性抗腫瘤T細(xì)胞免疫可能參與控制Y+腫瘤的生長(zhǎng)。接下來(lái),研究者通過(guò)光譜流式細(xì)胞術(shù),研究Y+和Y?腫瘤之間的瘤內(nèi)CD45+免疫細(xì)胞群的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn),CD8+T細(xì)胞、免疫抑制巨噬細(xì)胞(CD11b+ F4/80+ LY6C? CD206+)以及PD-L1+ CD45+免疫細(xì)胞在Y?腫瘤中占有更高的比例,而Y+腫瘤中的腫瘤浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞(CD11b+ F4/80+LY6C+ CD206?)表現(xiàn)出更顯著的炎癥性表型。使用GeoMX空間蛋白質(zhì)組學(xué)分析,也發(fā)現(xiàn)在Y?腫瘤組織切片中F4/80+巨噬細(xì)胞數(shù)量增加以及PD-1/PD-L1表達(dá)增加。通過(guò)結(jié)合已發(fā)表的單細(xì)胞數(shù)據(jù)集結(jié)合流式細(xì)胞數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)Ylow腫瘤細(xì)胞含有更高比例的耗竭CD8+T細(xì)胞,支持了LOY腫瘤促進(jìn)TME中CD8+ T細(xì)胞衰竭的推測(cè)。
Fig 3 Ylow 抑制T細(xì)胞免疫并賦予免疫抑制TME
接下來(lái),研究者利用CODEX進(jìn)一步驗(yàn)證snRNA-seq結(jié)果,并在組織學(xué)上評(píng)估T細(xì)胞衰竭水平。結(jié)果與snRNA-seq分析一致,Ylow膀胱癌中含有更高比例的功能失調(diào)的CD8+ T細(xì)胞。并且TOX在多種類(lèi)型的CD8+T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞中高表達(dá),這些數(shù)據(jù)支持了LOY腫瘤促進(jìn)TME中CD8+ T細(xì)胞衰竭的概念。
Ylow膀胱癌含有更高比例衰竭CD8+ T細(xì)胞
4、LOY腫瘤對(duì)anti-PD-1/PD-L1免疫治療的反應(yīng)
研究者發(fā)現(xiàn),與Y+腫瘤相比,Y?腫瘤模型在anti-PD-1治療后具有明顯的改善;在anti-PD-1治療后,Y?腫瘤的CD8+ T細(xì)胞對(duì)治療表現(xiàn)出更大的表型反應(yīng),從耗竭性狀態(tài)轉(zhuǎn)變到更活躍的分化狀態(tài)。而經(jīng)同型對(duì)照抗體處理的Y?腫瘤顯示,CD8+ T細(xì)胞衰竭標(biāo)志物TOX和TIM3的表達(dá)增加。接下來(lái),研究者在IMvigor210(anti-PD-1)臨床試驗(yàn)中,評(píng)估了Ylow和Yhigh膀胱癌患者的總生存期,發(fā)現(xiàn)Ylow膀胱癌患者在anti-PD-1治療后有更好的預(yù)后。
Ylow膀胱癌對(duì)anti-PD-1 ICB治療的反應(yīng)
02研究結(jié)論
LOY腫瘤通過(guò)促進(jìn)CD8+ T細(xì)胞衰竭來(lái)逃避適應(yīng)性免疫,在此過(guò)程中,LOY腫瘤對(duì)anti-PD-1 ICB也更敏感,其主要由于ICB介導(dǎo)了T細(xì)胞從衰竭分化為效應(yīng)功能的轉(zhuǎn)變。在基因評(píng)估中,發(fā)現(xiàn)Y染色體相關(guān)基因UTY和KDM5D的缺失有可能成為確定膀胱癌臨床侵襲性的重要預(yù)后因素,用于膀胱癌患者ICB治療可能會(huì)獲得更好的治療反應(yīng)以及生存結(jié)果。此外,UTY和KDM5D的短暫藥物抑制可能對(duì)正在接受ICB治療的Yhigh腫瘤患者提供更強(qiáng)的治療益處。
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原文標(biāo)題:Nature | DSP 平臺(tái)助力揭示Y染色體丟失通過(guò)適應(yīng)性免疫逃逸來(lái)驅(qū)動(dòng)腫瘤生長(zhǎng)
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