便攜式集成微流控生物芯片用于B組鏈球菌快速診斷

B組鏈球菌（Group B Streptococcus, GBS）是產(chǎn)后感染和新生兒感染中重要病原菌之一。特別是在妊娠過程中，可導致孕婦的早產(chǎn)、宮內感染等并發(fā)癥；在分娩期間也可能會導致新生兒敗血癥、腦膜炎或肺炎等一系列感染，是全球新生兒侵襲性感染的主要原因。每年導致9.1萬名新生兒死亡，4.6萬多名死產(chǎn)和4萬名感染后患有神經(jīng)殘疾的新生兒。因此，快速準確地診斷孕婦GBS對預防新生兒感染至關重要。對于城市或者城鎮(zhèn)醫(yī)院，已經(jīng)實現(xiàn)了基于規(guī)范化的實驗室的GBS普篩。但對于資源有限的偏遠鄉(xiāng)村地區(qū)的衛(wèi)生院及婦幼保健院，由于缺乏訓練有素的技術人員，以及額外的、高成本的儀器，GBS的快速診斷存在諸多挑戰(zhàn)。

據(jù)麥姆斯咨詢報道，針對上述需求，北京航空航天大學常凌乾課題組在《Biosensors ＆ Bioelectronics》（IF: 12.7）期刊上發(fā)表了題為“A portable, integrated microfluidics for rapid and sensitive diagnosis of streptococcus agalactiae in resource-limited environments”的研究文章，設計了一種便攜式集成微流控生物芯片，可以快速提取樣本拭子中的DNA，并進行快速擴增，最后通過試紙條可視化的讀取結果，整個流程控制在40分鐘以內。與傳統(tǒng)的NAAT（6小時）不同，該平臺是一種簡單、便攜、無電源的微流控平臺，僅通過簡單的手指擠壓操作，即可在1小時內完成DNA提取、富集、純化、擴增和檢測的整個過程，因此非常適合中心實驗室以外的各種場景。

作為革蘭氏陽性菌，GBS具有特有的細胞壁和莢膜結構，給傳統(tǒng)DNA提取方法帶來了額外的挑戰(zhàn)。針對此，研究人員設計了一步法DNA提取管，用PDMS隔片將提取管分成兩個獨立的區(qū)域，分別裝載樣本稀釋液和核酸裂解液。在操作中，被試者將取樣拭子放入稀釋液中釋放病原體，然后輕輕撥動PDMS隔片，使稀釋劑流向下方含有玻璃珠的裂解液。通過簡單地用手搖動提取管，并在提供的便攜式加熱裝置中加熱10分鐘，即可釋放DNA。

生物芯片平臺由三個功能區(qū)組成，包括DNA富集區(qū)、DNA擴增區(qū)和檢測區(qū)。通過使用設計的彈性軟管，擠壓軟管產(chǎn)生顯著的驅動力，將預包裝的相應緩沖液，包括裂解緩沖液(A-軟管)、洗滌緩沖液(B-軟管)、RPA緩沖液(C-軟管)、運行緩沖液(D-軟管)分別推入設備中的相應部位，產(chǎn)生不同的功能。在操作時擠壓A-軟管，驅動含有GBS DNA的液體流入富集區(qū)，DNA被預先填充的磁珠捕獲。并且，磁珠被生物芯片下面的磁鐵捕獲，使DNA固定在擴增區(qū)。其余的液體被收集在廢液池中；第二步，擠壓B-軟管，洗滌去除磁珠表面的雜質(包括各種蛋白質和離子)；第三步，擠壓C-軟管，使RPA緩沖液進入擴增區(qū)，在38℃下進行快速擴增；最后，擠壓D-軟管，將擴增溶液驅動到試紙條上，以讀出結果。在試紙條上，在檢測線（T線）上修飾鏈霉親和素，在質控線（C線）上修飾二抗，可以捕獲RPA體系中特異性探針的生物素和FAM基團，與膠體金形成“三明治”結構，顯示紅色條帶，表示陽性反應。

圖1 用于GBS快速診斷的生物芯片的設計理念和運行過程的原理示意圖

考慮到這樣一個簡單、便攜、可重復使用的設備可以用于中心實驗室以外的場景，該課題組設計了一個可重復使用的便攜式加熱裝置作為平臺附件。該裝置由4根彈性軟管組成，軟管內裝有相應的緩沖液(裂解緩沖液、洗滌緩沖液、RPA緩沖液、運行緩沖液)，依次完成核酸提取、富集/純化、擴增和讀出過程。核心加熱功能由電池供電，控制加熱板，單次反應持續(xù)加熱約40分鐘，分別用于DNA提取的95℃，和RPA反應的38℃。

研究團隊在中國甘肅省婦幼保健院（甘肅省中心醫(yī)院）進行了47例患者的陰道和肛門拭子樣本檢測。通過比較qPCR實驗室結果與PIM平臺的顯色反應，發(fā)現(xiàn)qPCR結果與新技術具有相同的靈敏度。最終，47例臨床樣本顯示，平臺靈敏度達到100%，與臨床PCR結果一致。

圖2 在臨床診斷中的應用

該研究通訊作者為北航生物醫(yī)學工程常凌乾教授、甘肅省中心醫(yī)院易彬教授、甘肅省腫瘤醫(yī)院蘇海翔教授。第一作者是北航博士生王之瑩，甘肅省中心醫(yī)院晏博博士、倪亞莉主任為共同第一作者。

審核編輯：劉清