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定量分析中怎樣選擇內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法
選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標(biāo)物（當(dāng)然是樣品中沒有的組分），然后配制欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣得相對校正因子。再將內(nèi)標(biāo)物加入欲測組分的樣品中，進(jìn)樣后測得欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù)。用內(nèi)標(biāo)法公式計算即可。
內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計算被測組分的含量。 選擇內(nèi)標(biāo)物有4個要求：1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；4.色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進(jìn)行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標(biāo)法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量，有時尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。 外標(biāo)法簡便，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準(zhǔn)確的測量結(jié)果。
內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對著不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問題，我想簡單而有效進(jìn)行定量分析來滿足要求才是最重要的
1、以前做過很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒有自動進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差，結(jié)果經(jīng)常受到搞合成同事的質(zhì)疑。其實，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們的實驗室儀器和手段是否調(diào)整到一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)了，比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化）、汽化溫度是否合適、色譜峰形是否對稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、附近有沒有其它色譜峰的干擾、選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）等等因素的影響都需要考慮，如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那么這個方法用外標(biāo)法就是完全適用的，但是前面的影響因素是一定要都考慮到的，否則談?wù)撨@個方法是否適用就有失偏頗了。在做過的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗證過的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（他們用的都是自動進(jìn)樣）精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求，當(dāng)一個方法能夠滿足測試要求的時候，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的，當(dāng)然有一個分析成本和分析時間的問題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。而有些時候，可能受你實驗室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，而還必須進(jìn)行定量分析，有時外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些，這時，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢來了。
2、上面已經(jīng)提到當(dāng)做方法驗證的時候，當(dāng)同一樣品配制6個樣品溶液用所選用的外標(biāo)法進(jìn)行定量的時候，RSD都滿足1.5%的要求時，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的結(jié)果小于1%，那這個方法就沒有什么可以懷疑的了；如果RSD的結(jié)果大于1%而在1.5%略低一些的范圍活動時，這個方法的可行性就將受到質(zhì)疑，畢竟這是方法驗證，你就要考慮上面1所提到的影響因素的影響了，如果排除掉以上的影響因素，RSD還是在1.5%附近，就要嘗試內(nèi)標(biāo)了，如果內(nèi)標(biāo)結(jié)果的RSD很好，就證明你的這個方法受實驗條件的影響很大，只能用內(nèi)標(biāo)了，或者干脆將原方法做大的變動，再嘗試用外標(biāo)法測試。
3、而對于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多，RSD有時可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間
4、單從精密度方面去考慮，排除其它成本和效率的因素，個人認(rèn)為還是內(nèi)標(biāo)優(yōu)于外標(biāo)。曾經(jīng)做過一個中間體二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺為內(nèi)標(biāo)，RTX-5 amine（堿改性） 15m*0.32mm*1.0um色譜柱分析，將配制好的控制溶液（含有內(nèi)標(biāo)物）自動進(jìn)樣器進(jìn)6針，目的物（二氨基丙醇）與內(nèi)標(biāo)物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，結(jié)果為0.71%，通過這一實例的結(jié)果大家就會發(fā)現(xiàn)到底哪個方法精密度更好了，當(dāng)然是內(nèi)標(biāo)更好了。當(dāng)然這個化合物的檢測方法最后根據(jù)上面的驗證數(shù)據(jù)用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)定量都是可以的，實驗室可以自由選擇。但內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)精密度結(jié)果的差異是顯然存在的事實。
結(jié)論：應(yīng)用外標(biāo)法能夠滿足要求，首選還是外標(biāo)法了，畢竟簡單而省事。對于精密度要求比較高、結(jié)果準(zhǔn)確度會產(chǎn)生重大影響、實驗室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標(biāo)法還是必要的。無論應(yīng)用那種方法，方法的驗證和確認(rèn)都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過驗證和確認(rèn)的方法，都有其應(yīng)用的空間的。
選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標(biāo)物（當(dāng)然是樣品中沒有的組分），然后配制欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣得相對校正因子。再將內(nèi)標(biāo)物加入欲測組分的樣品中，進(jìn)樣后測得欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的定量參數(shù)。用內(nèi)標(biāo)法公式計算即可。
內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計算被測組分的含量。 選擇內(nèi)標(biāo)物有4個要求：1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；4.色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進(jìn)行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標(biāo)法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量，有時尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。 外標(biāo)法簡便，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，要嚴(yán)格控制在與標(biāo)準(zhǔn)物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準(zhǔn)確的測量結(jié)果。
內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對著不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問題，我想簡單而有效進(jìn)行定量分析來滿足要求才是最重要的
1、以前做過很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒有自動進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差，結(jié)果經(jīng)常受到搞合成同事的質(zhì)疑。其實，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們的實驗室儀器和手段是否調(diào)整到一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)了，比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化）、汽化溫度是否合適、色譜峰形是否對稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、附近有沒有其它色譜峰的干擾、選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）等等因素的影響都需要考慮，如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那么這個方法用外標(biāo)法就是完全適用的，但是前面的影響因素是一定要都考慮到的，否則談?wù)撨@個方法是否適用就有失偏頗了。在做過的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗證過的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（他們用的都是自動進(jìn)樣）精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求，當(dāng)一個方法能夠滿足測試要求的時候，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的，當(dāng)然有一個分析成本和分析時間的問題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。而有些時候，可能受你實驗室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，而還必須進(jìn)行定量分析，有時外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些，這時，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢來了。
2、上面已經(jīng)提到當(dāng)做方法驗證的時候，當(dāng)同一樣品配制6個樣品溶液用所選用的外標(biāo)法進(jìn)行定量的時候，RSD都滿足1.5%的要求時，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的結(jié)果小于1%，那這個方法就沒有什么可以懷疑的了；如果RSD的結(jié)果大于1%而在1.5%略低一些的范圍活動時，這個方法的可行性就將受到質(zhì)疑，畢竟這是方法驗證，你就要考慮上面1所提到的影響因素的影響了，如果排除掉以上的影響因素，RSD還是在1.5%附近，就要嘗試內(nèi)標(biāo)了，如果內(nèi)標(biāo)結(jié)果的RSD很好，就證明你的這個方法受實驗條件的影響很大，只能用內(nèi)標(biāo)了，或者干脆將原方法做大的變動，再嘗試用外標(biāo)法測試。
3、而對于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多，RSD有時可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間
4、單從精密度方面去考慮，排除其它成本和效率的因素，個人認(rèn)為還是內(nèi)標(biāo)優(yōu)于外標(biāo)。曾經(jīng)做過一個中間體二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺為內(nèi)標(biāo)，RTX-5 amine（堿改性） 15m*0.32mm*1.0um色譜柱分析，將配制好的控制溶液（含有內(nèi)標(biāo)物）自動進(jìn)樣器進(jìn)6針，目的物（二氨基丙醇）與內(nèi)標(biāo)物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，結(jié)果為0.71%，通過這一實例的結(jié)果大家就會發(fā)現(xiàn)到底哪個方法精密度更好了，當(dāng)然是內(nèi)標(biāo)更好了。當(dāng)然這個化合物的檢測方法最后根據(jù)上面的驗證數(shù)據(jù)用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)定量都是可以的，實驗室可以自由選擇。但內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)精密度結(jié)果的差異是顯然存在的事實。
結(jié)論：應(yīng)用外標(biāo)法能夠滿足要求，首選還是外標(biāo)法了，畢竟簡單而省事。對于精密度要求比較高、結(jié)果準(zhǔn)確度會產(chǎn)生重大影響、實驗室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標(biāo)法還是必要的。無論應(yīng)用那種方法，方法的驗證和確認(rèn)都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過驗證和確認(rèn)的方法，都有其應(yīng)用的空間的。
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