種子細(xì)胞篩選與細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)

種子細(xì)胞篩選與細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
經(jīng)過(guò)多次繼代的懸浮細(xì)胞；配置含8%瓊脂糖的固體培養(yǎng)基，按組分裝成7份；配置液體培養(yǎng)基2升；每人2套滅菌培養(yǎng)皿。

5.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>掌握單細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)；了解細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)設(shè)備與進(jìn)樣接種技術(shù)。

5.2 種細(xì)胞的篩選
單細(xì)胞平板培養(yǎng)。
A. 將瓊脂糖培養(yǎng)基在加熱器上融化，將懸浮細(xì)胞過(guò)濾除去大的細(xì)胞團(tuán)，然后離心并將密度調(diào)整至5×105左右。
B. 將融化的瓊脂培養(yǎng)基在未凝固前，與上述細(xì)胞懸浮液按4:1混合后，平鋪在培養(yǎng)皿中，操作時(shí)特別注意溫度不能過(guò)高，以免給細(xì)胞造成傷害。
C. 在細(xì)胞分裂形成可見(jiàn)的小愈傷組織時(shí)，將單個(gè)細(xì)胞的愈傷組織分別接種在平板培養(yǎng)基上單獨(dú)培養(yǎng)，由每個(gè)細(xì)胞形成的愈傷組織即為一個(gè)細(xì)胞系（clone）。

* 實(shí)際應(yīng)用中，待單個(gè)愈傷組織長(zhǎng)至能檢測(cè)成分的大小時(shí)，取每個(gè)愈傷組織的一半用于成分分析，另一半繼續(xù)培養(yǎng)。成分分析完成后，淘汰不符合要求的愈傷組織，對(duì)復(fù)合要求的愈傷組織擴(kuò)大繁殖。繁殖到一定規(guī)模后即可用于規(guī)?；a(chǎn)。

5.3 細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)
以班為單位，將各自的懸浮細(xì)胞收集在一起，按照生物反應(yīng)器的進(jìn)樣操作接種，接種后每隔3天取樣測(cè)定培養(yǎng)情況，2周后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖。