反相HPLC色譜柱的再生步驟及其保養(yǎng)介紹

　反相HPLC色譜柱的推薦再生步驟

　　1.取下色譜柱，然后重新連接到色譜儀上，讓液體/氣體反方向流過(guò)色譜柱。

　　2.用HPLC級(jí)水沖洗掉鹽/緩沖液。以1毫升/分鐘的速度把25毫升水泵入色譜柱。

　　3.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　4.用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　5.用25毫升正己烷沖洗色譜柱。

　　6.再次用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　7.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　8.按正確的流動(dòng)方向，把色譜柱重新連接到色譜上。用不含緩沖液的流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后重新倒入緩沖液。

　　9.用25到50毫升流動(dòng)相平衡色譜柱。

　　10.注入標(biāo)準(zhǔn)物或樣品，檢查性能是否恢復(fù)。

　色譜柱的保養(yǎng)

　　在正常情況下，色譜柱至少可以使用3—6個(gè)月，能完成數(shù)百次以上的分離。但是，若操作不慎，將使色譜柱很易損壞而不能使用。因此為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須對(duì)色譜柱進(jìn)行仔細(xì)地保養(yǎng)。

　　1．色譜柱極易被微小的顆粒雜質(zhì)培塞，使操作壓力速升高而無(wú)法使用，因此必須將流動(dòng)相仔細(xì)地蒸餾或用0.45μm孔徑的濾膜過(guò)濾。在流動(dòng)相組貯槽與色譜柱間，安裝0.45μm孔徑的過(guò)濾器。在柱子上端接頭處裝上多孔過(guò)濾片，以防止固體顆粒進(jìn)入色譜柱中。在水溶液流動(dòng)相中，細(xì)菌容易生長(zhǎng)，可能堵塞篩板加入0.01％NoHa能防止能防止細(xì)菌生長(zhǎng)。

　　2．最好使用進(jìn)祥閥進(jìn)樣，以防止注射器進(jìn)樣時(shí)、注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。

　　3．對(duì)硅膠基鍵合相填科，水溶液流動(dòng)相的PH值不得超出2—8．5的范圍，使溫度不宜過(guò)高。柱子在酸性或堿性條件下使用之后，。應(yīng)依次用水、甲醇清洗，對(duì)暫時(shí)不用而需要較長(zhǎng)時(shí)間保存的柱子，要用純甲清洗，柱子兩端用金屬螺帽封閉，保存于干凈的有機(jī)溶劑中。

　　4．要防止色譜柱被振動(dòng)或撞擊，否則柱內(nèi)填料床層產(chǎn)生裂縫和空隙，會(huì)使色譜峰出現(xiàn)“駝峰”或“對(duì)峰”。

　　5．要防止流動(dòng)相逆向流動(dòng)，否則將使固定相層位移，柱效下降。

　　6．使用保護(hù)柱。連續(xù)注射含有未被洗脫樣品時(shí)，會(huì)使柱效下降，保留值改變。為了延長(zhǎng)柱壽命，在進(jìn)樣閥和分析柱間加上保護(hù)柱，其長(zhǎng)度一般為3—5cm，填充與分析柱性質(zhì)相似的表面多孔型固定相，因此可干法填裝。而且價(jià)廉、更換容易。實(shí)驗(yàn)表明，使用保護(hù)柱后，除了使擴(kuò)為零的組分的塔板數(shù)減少外，其柱效下降很少。