蠟梅花cDNA文庫(kù)構(gòu)建及其高頻出現(xiàn)脂轉(zhuǎn)移蛋白cDNA的表達(dá)

蠟梅花cDNA文庫(kù)構(gòu)建及其高頻出現(xiàn)脂轉(zhuǎn)移蛋白cDNA的表達(dá)

摘要：【目的】構(gòu)建蠟梅花cDNA 文庫(kù)，分析蠟梅脂轉(zhuǎn)移蛋白基因的表達(dá)，為探索蠟梅冬季開(kāi)花分子機(jī)理，分離克隆特色基因奠定基礎(chǔ)。【方法】以蠟梅花器官為材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 構(gòu)建文庫(kù)，RT-PCR 分析基因表達(dá)?！窘Y(jié)果】經(jīng)測(cè)定原始文庫(kù)滴度達(dá)到1.4×106 pfu/ml，擴(kuò)增總文庫(kù)滴度約為1010pfu/ml，重組率達(dá)到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均約1.1 kb，通過(guò)PCR 檢測(cè)，從總文庫(kù)中檢測(cè)到了表達(dá)豐度不同的蠟梅PI、AP3 和LTP 基因的特異片段，說(shuō)明所構(gòu)建的文庫(kù)覆蓋度高、代表性強(qiáng)，LTP 基因具有內(nèi)含子，而總文庫(kù)中擴(kuò)增出的LTP 基因不含內(nèi)含子，說(shuō)明所構(gòu)建的cDNA 文庫(kù)無(wú)基因組DNA 污染， LTP 基因在蠟梅開(kāi)花各個(gè)時(shí)期均表現(xiàn)較高的轉(zhuǎn)錄水平，與EST 分析時(shí)高頻率出現(xiàn)LTP 序列的情況相符，證實(shí)所構(gòu)建的文庫(kù)能夠反映蠟梅開(kāi)花過(guò)程基因表達(dá)的基本情況?！窘Y(jié)論】已獲得高質(zhì)量的蠟梅花cDNA 文庫(kù)，可以用于進(jìn)一步的基因克隆或EST 測(cè)序分析，這是首次正式報(bào)道蠟梅cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建。LTP 基因在蠟梅開(kāi)花過(guò)程中可能具有重要的生物學(xué)功能，為探索蠟梅冬季開(kāi)花分子機(jī)理提供了線索。
關(guān)鍵詞：蠟梅；cDNA 文庫(kù)；脂轉(zhuǎn)移蛋白基因；RT-PCR