體細(xì)胞雜交

教學(xué)目的與要求：
在進(jìn)一步認(rèn)識(shí)原生質(zhì)膜性質(zhì)的基礎(chǔ)上，深入了解細(xì)胞融合的基本原理，掌握電融合和
PEG融合的基本方法。
第一節(jié)、體細(xì)胞雜交的概念
體細(xì)胞雜交，即原生質(zhì)體融合。
植物細(xì)胞雜交的幾個(gè)重要進(jìn)展
1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質(zhì)體首次獲得成功；
1970年，Power首次用硝酸鈉進(jìn)行為誘導(dǎo)劑進(jìn)行了較大規(guī)模的原生質(zhì)體誘導(dǎo)融合；
1971年，Takebe首次從離體煙草原生質(zhì)體培養(yǎng)中獲得再生完整植株；
1972年，Carlson首次獲得粉藍(lán)煙草和郎氏煙草的細(xì)胞雜種，這也是第一個(gè)植物細(xì)胞雜種；
1974年，Kao將聚乙二醇誘導(dǎo)融合法應(yīng)用于植物細(xì)胞融合并建立了相應(yīng)的融合技術(shù)；
1978年，Melchers獲得了第一個(gè)屬間細(xì)胞雜種（番茄＋馬鈴薯）；
1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念；
1987年，Schweiger建立了單對(duì)原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。
根據(jù)融合時(shí)細(xì)胞的完整程度，原生質(zhì)體融合可分為兩大類：
? 對(duì)稱融合（asymmetric fusion）－即兩個(gè)完整的細(xì)胞原生質(zhì)體融合。
? 非對(duì)稱融合（symmetric fusion）－利用物理或化學(xué)方法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再
進(jìn)行融合，它可以分為幾種：
用于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)失活的方法分為物理和化學(xué)兩大類：
? 物理方法常采用射線處理，如X射線、射線等，它們能使細(xì)胞核失活；
? 化學(xué)處理目前常用的試劑有，核失活－碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸(Iodoacetate)；質(zhì)失活
－羅丹明（R－6－G，它是一種親脂染料，能夠抑制線粒體的氧化磷酸化過程而達(dá)到失
活作用。
第二節(jié)、原生質(zhì)體的融合
一、融合方法
1．PEG誘導(dǎo)融合法
? PEG誘導(dǎo)融合的特點(diǎn)：其優(yōu)點(diǎn)是融合成本低，勿需特殊設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較
高；融合過程不受物種限制。其缺點(diǎn)是融合過程繁瑣，PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。
? PEG的作用機(jī)理： Kao等認(rèn)為，由于PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極
性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進(jìn)而促使原生質(zhì)體的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動(dòng)
性，也使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。
? 融合技術(shù)要點(diǎn)：